Identifikasi Bakteri

Bakteri merupakan organisme bersel satu dengan ukuran yang sangat kecil sehingga tidak dapat diamati dengan mata telanjang. Dalam bidang kedokteran organisme ini sanngat berpengaruh karena dapat menyebabkan penyakit. Untuk mengetahui Jenis diperlukan pemeriksaan dilaboratorium. Proses identifikasi bakteri dapat perupa pengecatan, penanaman pada media plate, dan uji bio kimia. Salah satu tujuan pengecatan bakteri untuk mengetahui bentuk morfologi bakteri namun pada pengecatan belum bisa pastikan spesiesnya karena spesies yang berbeda bentuk morfologinya bisa sama. Penanaman pada media plate bertujuan untuk melakukan isolasi dan dari penanaman dapat diketahui bentuk koloni. Semantara Uji biokimia dilakukan untuk memastikan jenis/spesies bakterinya.

PEWARNAAN BAKTERI

1. Pewarnaan Gram
   
   1. Di buat sediaan pada slide,(kaca objek di bersihkan dengan alcohol), keringkan dan di fiksasi dg lampu spritus.
      
   2. Digenangi Gram A (Kristal violet) 1 menit.
      
   3. Sisa dibuang,bilas dg air.
      
   4. Digenangi Gram B (Lugol), 1 menit
      
   5. Sisa dibuang dan dibilas dengan air.
      
   6. Di genangi Gram C (alcohol 96%) 5-10 detik/asam alcohol 3% ½ menit
      
   7. Sisa alcohol dibuang,dibilas dengan air
      
   8. Di genangi Gram D ( Safranin) selama 30 detik/1 menit.
      
   9. Sisa dibuang,bilas dengan aquades.
      
   10. Keringkan dengan kertas saring
       
   11. Mikroskop 100X
       
2. Pewarnaan Tahan Asam
   
   1. Dibuat sediaan pada Slide ukuran 2x3,keringkan dan fiksasi dengan spritus.
      
   2. Dituangi Ziehl Neelsen A (Karbol Fuksin),panaskan sampai keluar uap, biarkan 5 menit.
      
   3. Sisa dibuang,dibilas dengan air.
      
   4. Digenangi Ziehl neelson B (Alkohol 96%), 5-10 menit/asam alcohol 5-15 menit sampai warna merah hilang.
      
   5. Sisa dibuang, bilas dengan air.
      
   6. Digenangi Ziehl Neelson C ( Methilen Blue) 30 detik/10-20 detik
      
   7. Sisa dibuang dan di bilas dengan air
      
   8. Keringkan dengan kertas saring.
      
   9. Mikroskop 100X
      
3. Pewarnaan Spora ( Schaefer Fulton)
   
   1. Dibuat sediaan pada slide,dikeringkan,dan fiksasi dengan spritus
      
   2. Sediaan digenangi Malacit Green dan dipanasi 5 menit
      
   3. Sisa warna dibuang dan bilas dengan air
      
   4. Digenangi Safranin selama 30 detik
      
   5. Sisa dibuang dan bilas dengan air.
      
   6. Keringkan dengan kertas saring.
      
   7. Mikroskop 100X
      
4. Pewarnaan Kapsul (Hiss)
   
   1. Dibuat sediaan di fiksasi.
      
   2. Digenangi larutan Kristal Ungu dan di panaskan selama 1 menit.
      
   3. Sediaan dicuci dengan CUSO4 20%
      
   4. Sediaan dikeringkan dengan kertas saring.
      
   5. Mikroskop 100X
      
5. Pewarnaan Flagel( Niesser)
   
   1. Di buat sediaan,dikeringkan dan di fiksasi.
      
   2. Di genangi Niesser AB selama 30 detik.
      
   3. Sisa dibuang,digenangi Niesser C selama 1 menit( tanpa dibilas dengan air)
      
   4. Sisa bahan dibuang
      
   5. Sediaan,dikeringkan dengan kertas saring.
      
   6. Mikroskop 100X
      

Identifikasi bakteri Gram +/-

Identifikasi Bakteri Gram -

Cara kerja :

1. Bakteri ditanam pada media plate, inkubasi 37C selama 24 jam.
   
2. Amati pertumbuhan koloni.
   
3. Taman di media gula-gula lengkap,Na,Mc,TSIA,SIM
   
4. Inkubasi 37C selam 24jam
   
5. Baca hasil
   

Hasil identifikasi

		SC	Gula-gula	SIM	TSIA	NA
1	Escherisia coli (Mac :berkabut)	+	+, +, +, +,+ (g)	-, + , +	k/k, + , -	+
2	Shigella flexneri		+, -, +, +, - (-g)	-, + , -	m/k, - , -
3	Salmonella tiphy			+, - , +	m/k, - , +
4	Klebsiella pneumonia (berlendir)	+	+, +, +, +, + (g)	-, -, -	k/k, -, -	+
5	Aerobacter aerogenes			-, -, +	k/k, +, -
6	Paratyphi B		+, -, +, +, - (+g)	+, -, +	m/k, +, +
7	Paratyphi C

Nb : membedakan Pratyphi B dan Paratyphi C dengan anti sera

Paratyphi B + antisera paratyphi B = + (terjadi kekeruahan)

Foto : Koloni Pseudomonas aerogenosa di media cetrimid

Foto : Koloni Escherishia coli di media TBX

Foto : Koloni Vibrio cholera di media TCBS


Foto : Uji biokimia Aeromonas cavae

Foto : Uji biokimia Escherishia coli

Foto : Hasil uji biokimia Proteus Vulgaris

Foto : Uji biokimia Klebsiella

Foto:Uji biokimia Enterobacter

Identifikasi Bakteri gram +

Cara kerja :

1.Tanam di BAP inkubasi 37C selama 24 jam

2.Lakukan cat gram pada koloni yang diduga bateri gram positif.

3.Tanam di BA dan BB inkubasi 37

4. Dilakukan uji katalasi dan dilakukan pengecatan gram

a Kata lase (+) tanam di DNase agar inkubasi 24 jam,

DNase digenangi HCL 10 N,lakukan Uji Koagulase

b Katalase (-) tanam di Evabrothc selama 24 jam

5 . Setelah 24 jam tahap 4.a dilakukan uji koagulase dan hasil di dibaca. Tahap 4.b baca juga hasilnya.

Contoh Jenis Bakteri Gram Positif :

1. Staphylococcus aureus

Uji biokimia

BA : Hemolisa
BB : Hemolisa
Katalase : +
Koagulase: +
Dnase : +

2. Staphylococcus epidermidis
BA : anhemolisa
BB : anhemolisa
Katalase :-
Koagulase -
Dnase : -

3. Streptococcus Pyogenes
BA : Hemolisa
BB : Hemolisa
Evabroth : -

4. Streptococcus Faecalis
BA : Anhemolisa
BB : Anhemolisa
Evabroth : +

Gambar... S.aureus Foto : Koloni di media MSA Dnase : ada zona jernih, BB : Hemolisa , BA : Hemolisa Foto : Uji Staphilase No. 1 (Stap :+) 2. Staphylococcus epidermidis Foto : Dnase (+), BA (anhemolisa), BB (anhemolisa) 3. Streptococcus faecalis Ket : BB (anhemolisa), Eva broth (+), BA(anhemolisa).

Share on Facebook

Share on Twitter

Share on Google+

Share on LinkedIn

Subscribe to receive free email updates: